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Le Macroaree

Macroarea 1 - Biotecnologie Cellulari e Molecolari

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Macroarea1


Rappresentante in Consiglio del Centro: Prof.ssa Alessandra Casuccio

Dipartimento di Promozione della Salute, Materno- infantile, Medicina interna e specialistica d’Eccellenza “G. D’Alessandro” – Sezione Igiene – Università di Palermo, via del Vespro, 133 – 90127 Palermo

Email: alessandra.casuccio(at)unipa.it

Tel. 0916553636

 

La Macroarea 1 "Biotecnologie cellulari e molecolari" ricomprende le attività del:

  • Laboratorio di Proteomica e Genomica con la produzione e la propagazione di colture cellulari primarie e staminali, l’analisi su larga scala di Dna, Rna e proteine, il bioimaging molecolare, la produzione di biomolecole per diverse applicazioni.
  • Laboratorio di biosintesi e produzione in camera bianca con le fermentazioni di specifici ceppi microbici per la produzione, purificazione e analisi funzionale di biomolecole di interesse in applicazioni di ricerca scientifica ed industriali in diversi settori quali biomedico, farmaceutico e agronomico e con la possibilità di svolgere tali operazioni in condizioni controllate secondo le procedure EU Good Manufacturing Practice (EU GMP).
  • Laboratorio di colture cellulari con strumentazioni all’avanguardia, trova applicazioni di ricerca nel campo della medicina rigenerativa
  • Laboratorio di spettrometria di massa con strumentazioni innovative LC/HR-MS fornisce analisi qualitative e/o quantitative di molecole organiche e sulla loro struttura chimica permettendone l’identificazione tramite misure di massa esatta ad alta risoluzione.


Attività e analisi

Le principali attività e analisi svolte nell’ambito della Macroarea 1 riguardano:

Analisi molecolari di alto livello tecnologico: caratterizzazione, attraverso analisi di profili genetici e proteici, di modelli sperimentali cellulari e animali; identificazione di marcatori specifici di risposta di cellule e tessuti all’esposizione a molecole con attività biologica e potenziale attività farmacologica; validazione prodotti per diagnostica molecolare; sviluppo servizi per diagnostica avanzata.

Sequenziamento Sanger (AB Genetic Analyzer 3500); analisi trascrittoma e mirnoma su microarray (piattaforma Agilent); analisi in microfluidica di DNA e RNA (Bionalyzer 2100); saggi ed analisi in colorimetria, spettrofluorimetria e luminometria su piastre multiwell (Tecan Spark, multireader); analisi di espressione tramite PCR e RT-PCR quantitativa (AB Quantstudio 6 Flex) includendo messa a punto primer specifici, estrazione e retrotrascrizione RNA (Hamilton Microlab StarLet).

Analisi 2D-DIGE di campioni proteici che include: estrazione e preparazione del campione proteico; marcatura delle proteine con fluorofori; mappe elettroforetiche bidimensionali di proteine; analisi su base statistica delle abbondanze relative delle specie proteiche nei campioni analizzati; escissione delle specie proteiche di interesse da gel (Typhoon FLA 9500). Biosintesi di macromolecole (i.e. enzimi) e metaboliti bioattivi (antibiotici, antitumorali; ormoni vegetali) mediante fermentazione in bioreattori di specifici ceppi selezionati e/o modificati geneticamente; purificazione dal brodo coltura esausto di fermentazione di macromolecole e metaboliti attivi d’interesse tramite sistemi di separazione, filtrazione tangenziale e cromatografia; produzione, purificazione e caratterizzazione di nano-vescicole extracellulari e di nanoparticelle metalliche di origine microbica; liofilizzazione di biomasse e biomolecole; biosintesi, purificazione e confezionamento del prodotto in forma di liofilizzato in condizioni controllate secondo le procedure EU Good Manufacturing Practice (EU GMP); analisi cromatografiche per la determinazione del grado di purezza del campione, del punto isoelettrico, della idrofobicità; separazione elettroforetica mediante SDS-PAGE e caratterizzazione tramite western blotting; analisi zimografica per attività idrolitiche su substrati specifici; determinazione di substrati sintetici di attività enzimatiche mediante analisi spettrofluorimetriche; saggi condotti usando il brodo coltura esausto di fermentazione per la determinazione di attività antimicrobica, anti-biofilm microbici e antitumorale; saggi per la determinazione di attività di promozione della crescita delle piante; determinazione della presenza di endotossine.

Analisi citofluorimetriche di marcatori di membrana o citoplasmatici; sorting cellulare mediante citofluorimetro con isolamento e caratterizzazione di cellule staminali; coltivazione di cellule staminali in vitro; coltivazione di cellule tumorali in vitro. Applicazione online FluoroFinder* per il supporto alla progettazione di esperimenti sulla base della configurazione del citofluorimetro sorter FACSAriaIII 4 laser presente all’interno del laboratorio. Caratterizzazione e sorting biofisico di sferoidi ed organoidi mediante lo strumento W8 (Cell Dynamics).

Analisi qualitative e/o quantitative di molecole organiche, identificazione strutturale di composti organici naturali e di sintesi, organometallici, studi di meccanismi di frammentazione tramite spettrometri di massa

Caratterizzazione di composti vegetali e fitocomplessi (antiossidanti, flavoni e flavonoidi).

Analisi di residui Extractables & Leachables da materiali, studi di polimeri e biopolimeri.

 

Finalità

Offerta di servizi relativi alla preparazione di cellule staminali, cellule primarie per studi di farmaco-resistenza e farmaco-genomica.

Produzione di biomolecole per applicazioni di ricerca ed industriali in campo Biomedico, Farmaceutico, Green Economy, Clinico.

Applicazioni in tematiche di ricerca in biologia cellulare, genomica e proteomica medicina rigenerativa: profili di espressione genica, determinazione del microbiota, allestimento ed analisi in multiplex PCR, costruzione di mappe proteomiche tramite elettroforesi bidimensionale (2D-gel).

Applicazioni in campo farmaceutico, metabolismo dei farmaci, sostanze stupefacenti e psicotrope, integratori alimentari e nutraceutici.

Applicazioni in campo alimentare: lipidi, proteine, carboidrati e polisaccaridi, vitamine ed alimenti funzionali.

Applicazioni in campo ambientale (pesticidi, IPA, POPs e CEC etc.).

  

Laboratori afferenti: